La profesora Ana Bratanich dirige el proyecto UBACYT que tiene por objeto el desarrollo de un test de ELISA para la detección de anticuerpos anti VIF utilizando como antígeno la proteína p24 producida en forma recombinante en nuestro laboratorio a partir de una cepa circulante local

Desarrollo de un test de ELISA para el diagnostico de infección por el virus de la inmunodeficiencia felina

La Universidad de Buenos Aires presenta una serie de notas escritas por los directores de los proyectos vigentes de las Programaciones UBACYT 2010 – 2012 y 2011 – 2014 con el objeto de difundir las actividades de investigación que se desarrollan en la Universidad y que procuran incidir en la realidad en la cual vivimos, mejorando las condiciones de vida actual y futura.
El virus de la inmunodeficiencia felina (VIF) es causante de una de las enfermedades infecciosas más comunes en los gatos domésticos, alcanzando una prevalencia del 45% en las poblaciones de riesgo. VIF pertenece a la familia Retroviridae, género Lentivirus y al igual que el virus de la inmunodeficiencia humana (VIH) en su fase aguda (SIDA) causa una lenta pero progresiva deficiencia del sistema inmune afectando así la respuesta a otros patógenos. Finalmente en el estadío terminal, aumenta la susceptibilidad a infecciones secundarias u oportunistas.
La principal vía de contagio es a través de la inoculación de saliva que contiene linfocitos infectados durante las mordeduras. La transmisión sexual, la forma más común de contagio de HIV en humanos, es inusual en VIF aunque en el semen de los gatos infectados está presente el virus.
Existen diversas técnicas para diagnosticar la presencia de del virus. Durante las dos primeras semanas de infección, el virus se encuentra en altas concentraciones en circulación y puede detectarse mediante el aislamiento del virus en cultivo celular y a través de la técnica de reacción en cadena de la polimerasa (PCR). Durante el estadio de persistencia, la carga viral, que es muy baja, coexiste con una respuesta inmune que se genera 60 días post infección. La detección serológica se realiza por inmunofluorescencia indirecta (IFI), ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay) y western blot, este último solo para casos dudosos. Los tests de ELISA detectan anticuerpos que reconocen proteínas estructurales del virus como la proteína de cápside p24. La detección por esta técnica puede verse afectada por la presencia de los anticuerpos maternos o vacunales con lo cual resulta difícil determinar infección real. En el caso de sospecha de anticuerpos maternos, en animales menores a 6 meses, se recomienda la PCR o una nueva prueba serológica a los 60 días. Para el caso de animales vacunados, se están estudiando variaciones de los ELISAs actuales para lograr diferenciarlos de los infectados.
En nuestro país, al no implementarse la vacunación contra VIF, el test de ELISA seria un método de diagnóstico adecuado. El principal problema es sin embargo su alto costo ya que los kits para la detección deben importarse. Asimismo, debido a que son elaborados en base a antígenos de cepas foráneas existe la posibilidad de que difieran en la detección de las cepas locales.
Por estas razones se propuso en este proyecto el desarrollo de un test de ELISA para la detección de anticuerpos anti VIF utilizando como antígeno la proteína p24 producida en forma recombinante en nuestro laboratorio a partir de una cepa circulante local. La secuencia que codifica para esta proteína se obtuvo por técnicas de amplificación (reacción en cadena de la polimerasa o PCR) siendo luego insertada en un plásmido procariótico que además incorpora en su esqueleto una región de varias histidinas (cola de histidina). Cuando el promotor de este plásmido fue estimulado la proteína se produjo en altas cantidades lo cual pudo ser visualizado en geles de poliacrilamida. Más adelante la proteína será purificada del resto de las proteínas bacterianas mediante el pasaje de la mezcla por columnas que permiten retener solo aquellas proteínas con cola de histidina. Con sueros de gatos infectados con VIF (y previamente analizados con los kits comerciales) que la cátedra de Virología de la Facultad de Ciencias Veterinarias de la UBA ha acumulado a lo largo de varios años, se estandarizarán las condiciones del ELISA antes de su aplicación diagnóstica.
El desarrollo de un ELISA en nuestro país permitirá reducir dramáticamente los costos del diagnóstico permitiendo, de esta manera, su uso masivo transformándolo en una herramienta de suma utilidad en la prevención de la inmunodeficiencia felina así como en el estudio de la de la epidemiología, la clínica y su tratamiento.

Fuente: UBA

http://www.uba.ar/comunicacion/noticia.php?id=3070

El súbito e inesperado aumento de la presión sanguínea se presenta como un rayo que rasga de un momento a otro el cielo azul del embarazo.

La preeclampsia, cuadro devastador que afecta a entre el 5 y el 8% de las mujeres gestantes (en general, de las que esperan su primer bebe), es una de las complicaciones más graves que surgen en esa etapa de la vida y puede producir convulsiones, accidente cerebrovascular, falla multiorgánica y hasta la muerte de la madre y/o el bebe.

Aunque se conoce desde las épocas de Hipócrates (hace más de 2000 años), el problema es que sus síntomas son inespecíficos (edema, repentino aumento de peso y proteinuria son algunos) y no existen actualmente métodos de diagnóstico precoz ni tratamientos, más allá de la inducción del parto.

Pero un trabajo que acaba de publicarse en la revista Hypertension , y que firman Federico Jensen y Ana Claudia Zenclussen, dos investigadores argentinos que trabajan en la Universidad de Magdeburgo, en Alemania, acaba de revelar una clave fundamental de la enfermedad: los científicos descubrieron que un subtipo de glóbulos blancos, los linfocitos B-1a, producen autoanticuerpos que desencadenan en esas mujeres una reacción autoinmune.

«Estos linfocitos aparecieron tempranamente en la evolución del sistema inmunológico y ya fueron asociados con otras enfermedades, como el lupus o la artritis reumatoidea», cuentan a través de una comunicación telefónica desde su laboratorio, en Alemania.

Ana y Federico no perdieron un ápice del acento argentino. «Es que, junto con mi mujer, que es bióloga y trabaja con el marido de Ana, hicimos un enclave en el Instituto de Obstetricia y Ginecología Experimental de la Facultad de Medicina de la Universidad de Magdeburgo -cuenta Jensen-. Hasta tomamos mate todas las tardes…» Hoy ambos son directora y subdirector, respectivamente, del Instituto.

Ana es santafecina y estudió bioquímica en la Universidad del Litoral. Llegó a Alemania tras obtener una de las más prestigiosas becas europeas, la Alexander von Humboldt, después de doctorarse en inmunología en la Universidad de Buenos Aires. El primer día que entró a su laboratorio en Berlín, conoció a un pediatra e investigador alemán con el que se casaría y tendría dos hijas.

«En 2007 acepté el cargo de profesora en Magdeburgo y el mismo año se postuló Federico, que venía de Dresden, a otro -cuenta Ana-. Yo hace 12 años que trabajo en inmunología de la reproducción, y cuando llegó Federico le propuse que estudiara las células B.»

UN MISTERIO MILENARIO

«Celsus -cuentan los investigadores- fue el primero en describir la preeclampsia como un «ataque» que ocurría durante el embarazo y que desaparecía luego del parto. Debido a que los síntomas aparecían de improviso, la llamaron «eclampsia», del griego «relámpago». Hacia la mitad del siglo XIX se la asoció por primera vez con presión elevada y proteinuria [presencia de proteínas en la orina], que son los únicos indicadores para diagnosticarla.»

Una de las hipótesis iniciales para explicar la preeclampsia la atribuyó a una respuesta exacerbada del sistema inmune de la madre a los antígenos paternos establecidos en el feto y su placenta. Pero en los últimos años se venía planteando la posibilidad de que se desencadenara por mecanismos autoinmunes.

«Esta nueva forma de pensar surgió de la detección de varios tipos de autoanticuerpos en mujeres que desarrollan preeclampsia y que están ausentes en mujeres con embarazos normales -explica Jensen-. Entre otros, uno dirigido contra un receptor de la [hormona] angiotensina (denominado AT1-AA) que influye tanto en la presión sanguínea como en los niveles de proteína en orina, ambos indicadores de la enfermedad. Sin embargo, si bien los autoanticuerpos estaban bien caracterizados, hasta ahora se desconocía su origen, es decir qué tipo de células los producen, y más importante aún, bajo qué condiciones.»

Jensen y Zenclussen confiesan que el resultado los tomó un poco por sorpresa.

«Hace diez años se detectaron autoanticuerpos en mujeres con preeclampsia -cuenta Zenclussen-. A partir de eso se los aisló y se empezaron a hacer trabajos en animales. Cuando se inyectaban en ratones, éstos desarrollaban todos los síntoma de la preeclampsia. Sin embargo, no nos esperábamos estos resultados.»

¿Pero qué es lo que gatilla la síntesis de esos autoanticuerpos?

«Esa justamente es una pregunta que nos plantearon los revisores del trabajo -dice Jensen-. Nosotros proponemos que uno de los factores desencadenantes podrían ser niveles elevados de gonadotropina coriónica humana. Esta hormona aumenta durante las primeras etapas del embarazo y, si está desregulada, se asocia con varias patologías, entre ellas la preeclampsia.»

CORAZÓN BINACIONAL

Según subrayan los investigadores, el trabajo abre enormes posibilidades, no sólo para diseñar estrategias que permitan reconocer mujeres con riesgo de desarrollar esta enfermedad antes de que se presente, sino también para encontrar posibles tratamientos.

«Para nuestro trabajo, medimos los niveles de B-1a en pacientes que ya estaban diagnosticadas y vimos que tenían niveles elevadísimos de estas células -explica Jensen-. Ahora, para que esto tenga impacto clínico y se puedan usar estas células en diagnóstico precoz, hay que hacer un estudio retrospectivo; es decir, seguir a las pacientes desde los inicios del embarazo y ver si esta población de células cambia. Es algo que ya estamos planeando, pero tenemos que decidir si es conveniente hacerlo en mujeres con mayor riesgo, qué número de pacientes deberíamos reclutar y con qué asiduidad deberíamos realizar los controles.»

Tanto Jensen como Zenclussen confiesan sentirse muy contentos por las posibilidades que les brinda el sistema científico del país europeo.

«Una vez que los conocés y trabajás con ellos, los alemanes son gente maravillosa -afirman, al unísono-. Pero siempre seguimos en contacto con la Argentina y hasta tenemos proyectos en conjunto con equipos del Conicet.»

Fuente: La Nacion

http://www.lanacion.com.ar/1451957-develan-un-enigma-del-embarazo

Se trata de una disciplina que pronto permitirá diseñar tratamientos médicos dirigidos a cada individuo, de acuerdo a las características de su ADN.

Hace algunos años, predecir antes de su nacimiento si una persona podría desarrollar Alzheimer o cáncer de mama, si tendría tendencia al alcoholismo o a la obesidad, podía ser sólo el resultado del arte de la adivinación. En la actualidad, es el resultado de la genómica, la ciencia que interpreta la información codificada en el ADN de los organismos.

“Poco tiempo atrás, leer toda la información del genoma de una persona era casi imposible�, afirma el doctor Martín Vázquez, investigador del Conicet y Gerente de Investigación del Instituto de Agrobiotecnología Rosario (Indear). Hoy existe la posibilidad técnica de secuenciar el genoma humano, pero su costo hace que no sea un estudio demasiado extensivo. Sin embargo, recientemente, una compañía proveedora de productos biotecnológicos anunció el lanzamiento de un equipo que permitiría bajar el valor a 1.000 dólares por secuenciación. “Estamos camino a pasar la tarjeta de crédito, como cuando compramos un par de zapatillas, y poder obtener nuestra información genética�, sostiene el investigador.

La genómica personalizada, como se denomina a esta disciplina que permite estudiar la información genética de un individuo particular, abre numerosas posibilidades. Una de ellas es el desarrollo de la medicina personalizada. “En el futuro, se va a poder dirigir una terapia específica hacia cada paciente�, cuenta el doctor Vázquez, y agrega: “Si bien hoy parece que esto es así, las farmacéuticas y la ciencia médica trabajan de manera poblacional: se sabe que la media de los habitantes responde a una determinada droga, pero queda un grupo que no, y otro al que le puede generar efectos adversos�.

Según explica el experto, a partir de la genómica personalizada se podría comprender cuáles son las mutaciones en el ADN de una persona que hacen que no responda a una cierta droga. “El médico va a tener una forma de interactuar con el paciente completamente diferente a la actual. La genómica le va a aportar una precisión inusual y le va a permitir dilucidar cuestiones que, de otra manera, hubiese sido imposible comprender�, indica el doctor Vázquez.

Si bien en ciertos casos las mutaciones genéticas permiten asegurar que determinada enfermedad se desarrollará, en otros simplemente indican una probabilidad de que esto ocurra. La genómica personalizada ampliaría las posibilidades de prevención: conocer las enfermedades a las que una persona es propensa, le permitiría evitar los factores de riesgo.

En la Argentina
“Pronto vamos a traer a nuestro país el mismo equipamiento que hoy se está usando en los mejores centros del mundo para secuenciar y leer información de los genomas humanos�, afirma Vázquez. Esto será posible gracias a un programa de la Agencia Nacional de Promoción Científica y Tecnológica, en el que también participan el Instituto Leloir y el INTA Castelar, para el financiamiento de una plataforma que permitirá tener tecnología de última generación en la Argentina.

En la actualidad, el Indear cuenta con un secuenciador de ADN de nueva generación, único en el país, que lee el genoma de microorganismos, hongos y plantas, adquirido gracias al apoyo del Conicet y de la Agencia, con el que ya se han realizado varios estudios, algunos relacionados con la genómica de microorganismos que causan infecciones en humanos. Por ejemplo, se trabajó conjuntamente con el Centro Nacional de Referencia para el SIDA para analizar por qué en determinados momentos, algunos pacientes con VIH dejan de responder al tratamiento con cierta droga y es necesario suministrarles otra.

Investigación en Indear
“Queremos seguir haciendo foco en las investigaciones sobre genómica vegetal y en salud humana a través de estrategias de partnerships o cooperación�, sostiene el doctor Vázquez. El Indear es un instituto de investigación del Grupo Bioceres dedicado a la biotecnología aplicada al agro. Dentro de su plantel cuenta con cuatro investigadores y tres becarios de Conicet. Sus investigaciones apuntan principalmente a dos líneas: la genómica de suelos, que estudia los microorganismos que lo habitan a través de su material genético y su interacción con las plantas; y el diseño de tecnologías para aumentar la productividad de los cultivos, haciéndolos tolerantes a la sequía y a la salinidad o resistentes a las plagas y a los herbicidas, entre otras características.

Fuente: CONICET

http://www.argentina.ar/_es/ciencia-y-educacion/C11293-genomica-en-argentina.php

El Ministerio de Salud incluyó el trasplante de pulmón en la lista del INCUCAI, a pedido del organismo, en base a la experiencia recogida y como consecuencia del avance médico-científico y los descubrimientos tecnológicos.

El Ministerio de Salud incorporó al pulmón a la nómina de los órganos y tejidos que podrán trasplantar, estableciendo que el Instituto Nacional Central Único Coordinador de Ablación e Implante (ICUCAI) determinará los criterios técnicos para la selección de donantes y receptores, como así también las condiciones que deberán reunir los establecimientos y equipos de profesionales para poder llevar a cabo la práctica.

Por Decreto 239/2012 publicado hoy en el Boletín Oficial, se modifica el Decreto Nº 512/95, relacionado con la nómina de los órganos y tejidos que podrán trasplantar.

El Decreto lleva la firma de la presidenta Cristina Fernández de Kirchner, el Jefe de Gabinete, Juan Manuel Abal Medina y el ministro de Salud, Juan Manzur.

En los considerandos expresa que como consecuencia del avance médico- científico y los descubrimientos tecnológicos, la actividad trasplantológica se encuentra en permanente evolución.

Agrega que atento a la experiencia recogida desde la vigencia de la Ley Nº 24.193, se ha podido comprobar la necesidad de proceder a la actualización de las pertinentes disposiciones reglamentarias en la materia.

Dice que las autoridades del Ministerio de Salud han considerado y evaluado la propuesta elaborada por el INCUCAI, organismo descentralizado de dicho Ministerio, para la incorporación del trasplante de pulmón proveniente de donante vivo relacionado.

Por ello, agrega, se hace necesaria la incorporación del órgano pulmón a la nómina referida, que complemente el texto legal reglamentario citado.

Fuente: Sala de Prensa.

http://www.argentina.ar/_es/pais/C11243-trasplante-de-pulmon-en-la-nomina-del-incucai.php

Una paciente de 85 años se convirtió en la primera en el país en recibir una novedosa cirugía: un reemplazo de válvula aórtica a partir de la combinación de técnicas quirúrgicas y hemodinamia, empleando la arteria aorta como acceso. Para la intervención, realizada en el Instituto de Medicina Cardiovascular del Hospital Italiano, no se necesitó detener el funcionamiento del corazón de la mujer.

La anciana padecía un estrechamiento de la válvula aórtica, asociado a la vejez, y no estaba en condiciones de atravesar una cirugía convencional. Para revertir este cuadro, se le practicó el procedimiento, que consiste en la colocación de una prótesis valvular a través de una apertura mínima del tórax (técnica quirúrgica) y la punción directa de la arteria aorta, donde la prótesis es insertada y guiada hasta el corazón (técnica de hemodinamia. Luego de cinco días de internación, la mujer fue dada de alta, con una bioprótesis aórtica funcionando adecuadamente.
Esta técnica es nueva en nuestro país y permite realizar el reemplazo de válvulas cardíacas de una forma menos invasiva que la cirugía convencional y así poder tratar a pacientes considerados de alto riesgo o no quirúrgicos por su edad o estado de salud. Se realizó en un quirófano híbrido, donde se conjugan técnicas quirúrgicas, de hemodinamia y de estudios por imágenes cardiovasculares.
La otra opción es la cirugía convencional a través de la apertura del tórax, ingresando por la ingle o el cuello a través de una arteria periférica o, finalmente, a partir de la combinación de ambas técnicas por punción directa de la arteria aorta o el corazón.

Fuente: Doc Salud

http://www.docsalud.com/articulo/3180/novedosa-cirug%C3%ADa-para-reemplazar-v%C3%A1lvula-card%C3%ADaca

El estudio de los científicos de la Fundación Instituto Leloir, publicado en la prestigiosa revista The Journal of Cell Biology, ilumina cómo se forman, robustecen y funcionan los puntos de comunicación entre las neuronas. Y abre nuevas líneas de investigación para comprender enfermedades neurodegenerativas como la enfermedad de Alzheimer, entre otras.

(Agencia CyTA – Instituto Leloir)-. Un mecanismo clave para la formación, el robustecimiento y el funcionamiento de las sinapsis –punto de comunicación entre las neuronas– acaba de ser descubierto y descrito por científicos argentinos. Por su relevancia, el estudio fue publicado en la prestigiosa revista científica The Journal of Cell Biology e incluido por el servicio internacional de revisión de artículos científicos (Faculty of 1000) dentro del dos por ciento de los trabajos más destacados de un total de 1500 estudios del área de la medicina y de la biología publicados a lo largo de un mes en destacadas revistas científicas.

Desde hace mucho tiempo se sabe que en la dendrita, que es el sitio de la neurona que recibe los estímulos provenientes del axón o prolongación de otra neurona adyacente, se fabrican localmente proteínas que fortalecen la sinapsis. “Sin embargo, poco se conoce sobre los mecanismos moleculares involucrados en este proceso�, explica la doctora Graciela Boccaccio, investigadora del CONICET y jefa del Laboratorio de Biología Celular del RNA del Instituto Leloir, donde se realizaron los estudios.

Trabajando con neuronas del hipocampo (región del cerebro asociada con los aspectos cognitivos), el equipo de Boccaccio logró identificar la presencia de paquetes de ARN mensajero temporalmente inactivos, a los cuales llamaron “focos de silenciamiento de mensajeros�.

Cuando forman estos paquetes o agregados, visibles al microscopio, los ARN mensajeros no pueden liberarse ni cumplir su misión: transmitir las instrucciones del núcleo para que se fabriquen proteínas en el resto de la célula (las cuales, a su vez, son críticas para fortalecer las sinapsis y consolidar la comunicación entre neuronas que permite la memoria y el aprendizaje). Los ARN mensajeros, en este contexto, son como una legión de carteros amuchados que no pueden salir a repartir las cartas.

¿Cómo hacen entonces? Boccaccio y su equipo realizaron estudios in vitro en neuronas de rata, un modelo experimental que reproduce en gran medida lo que ocurre en el cerebro humano. Estimularon esas neuronas con un neurotransmisor, NMDA, que está involucrado con la consolidación de la memoria. Y observaron que NMDA disolvió los focos de silenciamiento y, acto seguido, “los ARN mensajeros almacenados fueron liberados para permitir la síntesis de proteínas (como la enzima CamKIIa) y reforzar la sinapsis�, señala Boccaccio.

De acuerdo a la especialista, se trata de un mecanismo de fabricación o síntesis local de proteínas “exquisitamente controlado� y que se describe en detalle por primera vez.

Otro hallazgo

Aunque los focos de silenciamiento podrían considerarse, a primera vista, como “obstáculos� para la eficiente acción de los ARN mensajeros, su ausencia tiene efectos dramáticos sobre la morfología y el funcionamiento de las sinapsis.

Así lo demostró también el grupo del Leloir, que identificó una proteína, Smaug 1, que resultó fundamental para la formación de estos focos en las sinapsis.

“Para conocer la importancia de esta proteína, bloqueamos el gen que la codifica (dirige su fabricación)�, destaca Boccaccio. El gen Smaug 1 en humanos es prácticamente igual al de roedores, por lo que, nuevamente, los científicos usaron neuronas de hipocampo de rata.

Tras “apagar� el gen Smaug 1, los investigadores hicieron una observación sorpresiva: se producía un defecto sináptico muy serio. Las neuronas se desarrollaban de forma incompleta, con sinapsis muy pequeñas que no respondían en absoluto al estímulo procedente de las neurona de al lado. “Estos defectos, además de una morfología globalmente muy alterada, son muy similares a lo que se observa en varias enfermedades neurodegenerativas�, añade Boccaccio.

Y no sólo eso: Boccaccio y sus colegas se sorprendieron por el parecido bioquímico entre los focos de silenciamiento (también llamados “focos de Smaug�), que la neurona usa para controlar la respuesta sináptica, con los agregados proteicos presentes en varias patologías neurodegenerativas y en situaciones de estrés o daño celular.

“Quizás es posible que los agregados de proteínas dañadas interactúen con los focos de Smaug 1, interfiriendo de este modo con su importante función en la consolidación de las sinapsis. Por ahora se trata sólo de una pregunta abierta que requiere ser explorada�, subraya la investigadora.

Para el doctor Carlos Dotti, investigador principal del Centro de Biología de Patologías de la Universidad Católica de Lovaina, en Bélgica, el estudio argentino tiene el gran mérito de descubrir el papel clave de la proteína Smaug 1 en la formación de la sinapsis. “Pero su segundo mérito�, agrega, “es que permite abrir nuevas líneas de investigación, incluyendo la posible participación del mecanismo de represión de Smaug 1 en la inducción de patologías tales como retardo mental, depresión o Alzheimer.�

El estudio –en el que también participaron María Verónica Baez, Luciana Luchelli, Darío Maschi, Martín Habif, Malena Pascual y María Gabriela Thomas– contó con el apoyo de la UBA, del CONICET, de la Agencia Nacional de Promoción Científica y Tecnológica y del Programa FIRCA (The Fogarty International Research Collaboration Award) del Instituto Nacional de Salud de Estados Unidos.

Los autores del estudio, Martín Habif (izq.), Gabriela Thomas, Verónica Baez, Malena Pascual, la doctora Graciela Boccaccio, jefa del Laboratorio de Biología Celular del RNA del Instituto Leloir, Luciana Luchelli y Darío Maschi.

Créditos: Agencia CyTA

Neurona con focos de Smaug1, una estructura clave para las sinapsis. Fue descubierta por los investigadores del Instituto Leloir.

Créditos: Laboratorio de Biología Celular del RNA de la FIL

Fuente: CyTA

http://www.agenciacyta.org.ar/2012/02/investigadores-argentinos-hallan-mecanismo-clave-de-las-sinapsis/